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人激肽释放酶2(KLK2)酶联免疫分析试剂盒

分类:诊断试剂 发布时间:2018-10-31 16:03 所在地:
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详细内容

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人激肽释放酶2(KLK2)酶联免疫分析试剂盒原理:
采用双抗体夹心法测定人雄激素结合蛋白(ABP)水平。用纯化的人雄激素结合蛋白(ABP)抗体包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入样本及标准品,并加入 HRP 标记的 ABP 抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,反复洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。颜色的深浅和样品中的 ABP含量呈正相关。采用酶标仪在 4*0nm 波长测定吸光度(OD 值),根据标准曲线,计算测试样品中 ABP 浓度。 
实验材料与试剂配制:
*. 仪器与材料:酶标仪(使用前预热*0分钟),微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。
2. 缓冲液使用:加*ul 的缓冲液于*0ul 的样品中,如果样品量不够或者不确定,缓冲液和样品的混合比例不要小于*:*0即可。
混匀,静置*小时备用(如果标本是血清或者血浆,此步骤忽略)。
*. 洗液的配制:按*:*00的比例配制洗液备用。
样品收集、处理及保存
*. 细胞培养上清:适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液,以*000×g离心**分钟,收集上清。
2. 细胞:用PBS反复洗涤细胞*次,调整细胞浓度达到*04
-*06
/ml 左右,通过反复冻融,使细胞破坏并放出细胞内成份,或
者细胞超声粉碎,离心取上清液检测。
*. 血清:在室温下,血液自然凝固,以*000×g离心**分钟,取上清待测。
4. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后静置*0-20 分钟后,以*000×g离心**分钟,收集上
清。
*. 体液:包括胸腹水、脑脊液,分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集,以*000×g离心**分钟,收集上清。
6. 组织标本:切取组织标本,称取重量0.*mg,加入*00ul 的PBS,用手工或匀浆器,或超声破碎仪将标本匀浆,以2000-*000
rmp离心20 分钟,收集上清进行检测。
*. 样品中不能含有NaN*,因NaN* 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
8. 保存:如果样品不能立即检测,应将其分装,-*0 ℃保存,避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀,应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在**℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤:
*. 取出试剂盒,室温(20-2*℃)放置 *0 分钟。
2. 分组:取出 *6 孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准
品组(6 个浓度)、空白孔、待测样品组。
注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。
*. 加样:依照标准品的顺序分别加入 *0ul 的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入 *0ul 的蒸馏水;其余微孔中加入 *0ul
的待测样本。
4. 加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入 *00ul 的酶标溶液(空白对照孔除外)。
*. 温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于 **℃恒温孵育 * 小时。
6. 洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置 **-*0s,充分清洗酶标板 * 次,用吸水纸彻底拍干。
*. 显色:各孔加入显色剂 A 液 *0ul 后,再加入显色剂 B 液 *0ul。
8. 终止:2*-**℃下避光反应 *0-** 分钟,加入 *0ul 终止液。
*. 读板:在 4*0nm 波长读取各孔的 OD 值。
注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的 *0 分钟内,以免影响准确性。
注意事项:
*. 实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样时,要控制加样速度,避免*孔与*一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性。
*. 孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。
*. 建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
6. 建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商沟通,如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。
安全性
*. 避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。
*. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
人激肽释放酶2(KLK2)酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期:
*.试剂盒保存:2-8℃
2.有效期:6个月

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