牛β羟丁酸(BHBA)酶联免疫分析ELISA试剂盒实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中牛β羟丁酸(BHBA)水平。用纯化的牛β羟丁酸(BHBA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的β羟丁酸(BHBA)标准品和未知浓度的β羟丁酸(BHBA)待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的β羟丁酸(BHBA)呈正相关。用酶标仪在4*0nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛β羟丁酸(BHBA)浓度。

试剂盒组成

*

*0倍浓缩洗涤液

20ml×*瓶

 

 

8

标准品S*（*8μmol/L）

0.*ml×*瓶

2

链霉亲和素-HRP

6ml×*瓶

标准品S2（*2μmol/L）

0.*ml×*瓶

*

酶标包被板

*2孔×8条

标准品S*（6μmol/L）

0.*ml×*瓶

4

生物素标记的抗-IgG抗体

6ml×*瓶

标准品S4（*μmol/L ）

0.*ml×*瓶

*

显色剂A液

6ml×*瓶

标准品S*（*.*μmol/L）

0.*ml×*瓶

6

显色剂B液

6ml×*/瓶

*

说明书

*份

*

终止液

6ml×*瓶

*0

封板膜

2张

 

牛β羟丁酸(BHBA)酶联免疫分析ELISA试剂盒标本要求

*．不能检测含NaN*的样品，因NaN*抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤

根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品*0μl，在样本反应孔中加入*0微升样本，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，**℃温育4*分钟。
配液：将*0倍浓缩洗涤液用蒸馏水*0倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置*0秒后弃去，如此重复4次，拍干。
加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体*0μl。**℃温育*0分钟
洗涤：操作同4。
加链霉亲和素-HRP：每孔加入*0μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，**℃温育*0分钟。
洗涤：操作同4。
显色：每孔先加入显色剂A *0μl，再加入显色剂B *0μl，轻轻震荡混匀，**℃避光显色**分钟.
终止：每孔加终止液*0μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，4*0nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后**分钟以内进行。
 

计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

*．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡**-*0分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

*．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在*分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先将样本稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数（×*×n）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。

*．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

*. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

线形范围：

0 -22μmol/L

规格：

*6人份/盒

牛β羟丁酸(BHBA)酶联免疫分析ELISA试剂盒保存条件及有效期

*．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月