鱼补体C*（C*）定量检测试剂盒【检测原理】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被鱼补体C*（C*）抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中鱼补体C*（C*）浓度呈正相关，4*0nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中鱼补体C*（C*）含量。

【试剂盒组成】

*

酶标包被板

*2孔×8条

*

显色剂A液

6mL

2

标准品：*60μg/mL

0.6mL

8

显色剂B液

6mL

*

20倍浓缩洗涤液

2*mL

*

终止液

6mL

4

标准品稀释液

6mL

*0

说明书

*份

*

样本稀释液

6mL

**

封板膜

2张

6

酶标试剂

6mL

*2

密封袋

*个

备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：*60、80、40、20、*0、*μg/mL

 

【需要而未提供的试剂和器材】

*、**℃恒温箱

2、标准规格酶标仪

*、精密移液器及一次性吸头

4、蒸馏水

*、一次性试管

6、吸水纸

鱼补体C*（C*）定量检测试剂盒【操作步骤】

*、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡*0分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

*、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品*0μL；待测样本孔中先加入待测样本*0μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释*倍）；空白对照孔不加。

4、温育：**℃水浴锅或恒温箱温育*0min。

*、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置*min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液*0μL，空白对照孔不加。

*、温育：重复4的操作。

8、洗板：重复*的操作。

*、显色：每孔先加入显色剂A 液*0μL，再加入显色剂B液 *0μL，**℃避光显色**min。

*0、终止：取出酶标板，每孔加终止液*0μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

**、测定：以空白孔调零，在终止后**分钟内，用4*0nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

*2、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样本要求】

*、样本不能含叠氮钠（NaN*），因为叠氮钠（NaN*）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

*、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

*、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

*、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

4、牢记样本已经稀释*倍，计算结果乘以*才是样本实际浓度。

*、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

6、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。

*、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

8、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

 

 

 

 

 

【操作程序总结】

 

准备试剂，样品和标准品

 


 

加入准备好的样品和标准品，**℃反应*0分钟

 

洗板4次，加入酶标试剂，**℃反应*0分钟

 

洗板4次，加入显色液A、B，**℃显色**分钟

 

加入终止液

 

**分钟之内读OD值

 

计算

 

【检测范围】

*-*60μg/mL

【规格】

*6人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

鱼补体C*（C*）定量检测试剂盒【有效期】

6个月