PCR 反应的体系主要是由TAQ DNA 聚合酶、寡核苷酸、4 种DNTP、靶序列DNA、PCR反应缓冲液体系所组成。Pcr反应的顺利进行主要依赖于pcr引物的设计合理以及pcr的反应体系配置比例精准等。那么pcr体系应该怎么配？配制需要注意什么呢？

        标准的PCR反应体系：需要10倍的扩增缓冲液 10ul，4种dNTP混合物各200umol/L，引物 个需要10～100pmol，模板DNA 0.2ug， Taq DNA聚合酶2.5u，Mg2+1.5mmol/L 进行加双或三蒸水处理至100ul。PCR反应的五个要素主要是指参加PCR反应的物质主要有五种，即引物、酶、dNTP、模板、Mg2+引物，引物是关键，PCR产物特异性取决于引物与模板DNA互补。从理论上来讲，只要任何一段模板的DNA序列是已知的，那么我们就能按其互补的寡核苷酸链做引物，将模板DNA在体外进行大量的扩增。

        但是设计pcr体系应该遵循以下原则：

        1、引物长度：15-30bp，常用为20bp左右；

        2、引物扩增的跨度：以200-500bp为宜，在特定的条件下，可扩增至10kb的片段；

        3、引物碱基：G+C含量通常以40-60%为宜，太少扩增不佳，过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤成串排列；

        4、需要避免引物的内部出现二级结构现象，还要避免两条引物间的互补，否则会形成引物二聚体；

        5、引物3’端的碱基，应严格要求配对，避免PCR失败；

        6、被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对进行酶切分析或者是分子克隆很有帮助；

        7、引物具有一定的特异性：引物应与核酸序列无明显的同源性。

        Pcr体系的配制是一件要去比较严格的事情，配制期间需要严格按照精准的数量进行，不能随意更改缓冲液或者混合物的容量，否则都会对实验造成影响。